Разработка метода получения суспензии эндотелиальных клеток роговицы человека и её последующей трансплантации в эксперименте ex vivo

Авторы

  • Б.Э. Малюгин НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, Москва; Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова, Москва
  • С.А. Борзенок НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, Москва; Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова, Москва
  • Д.С. Островский НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, Москва
  • О.П. Антонова НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, Москва
  • М.Х. Хубецова НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, Москва
  • Н.Р. Цикаришвили НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, Москва

Ключевые слова:

эндотелиальные клетки, культивирование, трансплантация роговицы, эндотелиальная кератопластика, хирургическая техника, клеточные линии

Аннотация

Цель. Разработать способ получения суспензии нативных эндотелиальных клеток роговицы человека.
Материал и методы. Для получения суспензии нативных эндотелиальных клеток использовали 20 корнеосклеральных дисков, выделенных из энуклеированных глаз экспериментальных животных (свиньи), и 28 кадаверных корнеосклеральных дисков, выделенных от доноров-трупов (человека). В ходе работы для получения культуры клеток были использованы следующие способы выделения: механический, энзимный, а также предложенные в ходе эксперимента модифицированные варианты указанных способов.
Результаты. Выявлено, что механический и модифицированный механический способы выделения позволяют получить более 95% эндотелиальных клеток роговицы. Применение энзимного способа дало низкие результаты, которые не превышали 15% выделенных клеток эндотелия, что объяснялось отсутствием прямого механического воздействия по отделению клеток от Десцеметовой мембраны (ДМ). Статистически достоверной разницы в группах свиных и человеческих роговиц выделения суспензии эндотелиальных клеток механическим и энзимным способом выявлено не было. Модифицированный энзимный способ на человеческих роговицах обеспечил 100% выделение эндотелиальных клеток роговицы с ДМ. При анализе чистоты суспензии было выявлено, что механический и модифицированный механиче-
ский способы выделения не исключают попадания крупных сторонних частиц. В образцах, полученных энзимным способом данные частицы отсутствовали. При сравнении модифицированных способов выделения суспензии эндотелиальных клеток было выявлено их статистически достоверное различие, в частности, более низкие показатели загрязнения сторонними частицами отмечены при модифицированном энзимном способе.
Заключение. Проведенное экспериментальное исследование является первым этапом разработки эффективного и безопасного способа получения суспензии эндотелиальных клеток для их последующего культивирования или применения в клинической практике для замещения дефектов эндотелиального слоя, например у пациентов с буллезной кератопатией.

Библиографические ссылки

1. Weiss JS1, Moller HU, Aldave AJ, Seitz B, Bredrup C, Kivelä T, Munier FL, Rapuano CJ, Nischal KK, Kim EK, Sutphin J, Busin M, Labbé A, Kenyon KR, Kinoshita S, Lisch W. IC3D classification of corneal dystrophies. Ed.2nd. Cornea. 2015;34(2): 117–159.

2. Gorovoy MS. Descemet-stripping automated endothelial keratoplasty. Cornea .2006;25(8): 886–889. doi: 10.1097/01.ico.0000214224.90743.01

3. Малюгин Б.Э., Шилова Н.Ф., Антонова О.П., Анисимова Н.С., Шормаз И.Н. Сравнительный анализ клинико-функциональных результатов задней послойной кератопластики с использованием фемтосекундного лазера и микрокератома. Офтальмохирургия. 2019;(1): 20–26. [Malyugin BE, Shilova NF, Antonova OP, Anisimova NS, Shormaz IN. Comparative analysis of clinical and functional results of posterior layered keratoplasty using femtosecond laser and microkeratome. Fyodorov Journal of Ophthalmic Surgery. 2019;(1): 20–26. (In Russ.)] doi: 10.25276/0235-4160- 2019-1-20-26

4. Melles GR, Ong TS, Ververs B, van der Wees J. Descemet membrane endothelial keratoplasty (DMEK). Cornea. 2006;25(8): 987–990. doi: 10.1097/01. ico.0000248385.16896.34

5. Малюгин Б.Э., Шилова Н.Ф., Анисимова Н.С., Антонова O.П. Трансплантация эндотелия и Десцеметовой мембраны. Вестник офтальмологии. 2019;135(1): 98–103. [Maliugin BE, Shilova NF, Anisimova NS, Antonova OP. Transplantation of endothelium and Descemet’s membrane. The Russian Annals of Ophthalmology. 2019;135(1): 98103. (In Russ.)]. doi: 10.17116/oftalma201913501198

6. Parikumar P, Haraguchi K, Senthilkumar R, Abraham SJ. Human corneal endothelial cell transplantation using nanocomposite gel sheet in bullous keratopathy. Am J Stem Cells. 2018;7(1): 18–24.

7. Kinoshita S, Koizumi N, Ueno M, et al. Injection of cultured cells with a ROCK inhibitor for bullous keratopathy. N Engl J Med. 2018;378(11): 995–1003. doi: 10.1056/ NEJMoa1712770

8. Федеральный закон от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах». Доступно по: https://minzdrav.gov.ru/ministry/61/23/ stranitsa-967/federalnyy-zakon-ot-23-iyunya-2016-g-180-fz-o-biomeditsinskihkletochnyh-produktah [Ссылка активна на 14.11.2022]. [Federal Law No. 180-FZ of June 23, 2016 «On Biomedical Cell Products». Available from: https://minzdrav.gov.ru/ministry/61/23/stranitsa-967/federalnyy-zakon-ot-23-iyunya-2016-g-180-fz-obiomeditsinskih-kletochnyh-produktah [Accessed 14th November 2022] (In Russ.)]

Загрузки

Опубликован

2022-12-22

Выпуск

№ 4 (2022): Офтальмохирургия

Раздел

Статьи

Категории

Лицензия

Лицензия Creative Commons

Это произведение доступно по лицензии Creative Commons «Attribution-NonCommercial» («Атрибуция — Некоммерческое использование») 4.0 Всемирная.

Наиболее читаемые статьи этого автора (авторов)

1 2 3 4 5 > >>